Enterobakterilerin ve bazı vibrioların diferansiyel tayininde Voges-Proskauer reaksiyonu özel bir yer tutar. Test, bakterilerin glikozu asetoin oluşturmak üzere fermente etme yeteneğine dayanmaktadır.
Araştırma sürecinin özü
Mikrobiyolojide, Voges-Proskauer reaksiyonu genellikle Yersinia enterobakteri ailesini (psödotüberküloz ve enterokolit patojenleri dahil), Escherichia coli ve spor oluşturan aerobları ayırt etmek için kullanılır. Sonuç, belirli reaktifler eklendiğinde ortamın renklendirilmesiyle görselleştirilir.
Bu test, IMViC serisine aittir (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate'in kıs altması) - diferansiyel tanımları içeren bir grup tanımlama testi:
- indol ile, bir Kovacs veya Ehrlich reaktifi varlığında kullanılan, triptofanın indole parçalanmasına dayalıdır;
- kullanarakglikoz metabolizasyonunun bir sonucu olarak belirli bir pH'ı algılayan metilroth veya metil kırmızısı;
- Asetil-metilkarbinolün saptanması için Voges-Proskauer reaksiyonları;
- ortamın alkalileştirilmesi sonucu renk değişimi ile sitrat kullanımı.
İşlemin özü, oksijen varlığında kostik potas ile oluşturdukları asetoinin etkileşimi nedeniyle teşhis edilen bakterilerin varlığının görselleştirilmesidir. Asetil-metilkarbinol, parlak kırmızı veya pembe bir bileşik oluşturan diasetil'e oksitlenir. Kostik potas eklemeden önce alfa-naftol ekleyerek testin hassasiyetini artırın.
Test ayarı
Voges-Proskauer reaksiyonunun formülasyonu, mikroorganizmaların ön kültivasyonunu içerir. Bir varyasyonu Clark'ın suyu olan (agar-agar ilavesi olmadan) Clark'ın ayırıcı tanı ortamına saf bir kültür ekilir. Ya hazır ortam kullanılır ya da bağımsız olarak hazırlanır. Malzemeler şunları içerir:
- 5g pepton;
- 5g glikoz;
- 5g dibazik potasyum fosfat;
- 1L distilat.
Çalışma sırasında kültür, steril bir bakteriyolojik öze ile sıvı bir ortama aşılanır. Miktar - Bir test tüpü artı kontrolde 5 ml. Kuluçka, iki gün boyunca 35-37 derece sıcaklıkta gerçekleştirilir. Ardından, Voges-Proskauer reaksiyonunun bir çalışması aşamalar halinde gerçekleştirilir:
- 2, 5 ml et suyu kültürü steril bir tüpe aktarılır.
- Altı damla alfa-naftol (%5 alkol solüsyonu) ekleyin.
- %40 ekleyin0.1 ml veya iki damla miktarında bir kostik potasyum çözeltisi.
- Karıştırma, test tüpünü hafifçe sallayarak gerçekleştirilir.
- Deneyin başlangıcından 15 dakika sonra sonucu değerlendirin.
Alternatif bir test yöntemi, süresi 18 saate veya bir güne düşürülen gece boyunca inkübasyondur. Bu yönteme ek olarak, bir ekspres test de kullanılır: bir öze içinde 2 ml ortam içine bir kültür eklenir, yaklaşık dört saat inkübe edilir, ardından reaktifler eşit miktarda 2-3 damla eklenir, karıştırılır ve sonuç on dakika sonra değerlendirilir.
Kontrol, pnömoniye neden olan ajanlardan biridir Klebsiella pneumoniae - atcc 13883 suşu.
Sonucun değerlendirilmesi
Reaktifleri ekledikten sonra gereken süreden sonra (5 ila 15 dakika arasında), belirgin bir pozitif reaksiyon ile kiraz kırmızısı bir renk gözlemlenmelidir, kırmızı ve pembe - zayıf bir pozitif reaksiyon ile. Negatif sonuç olarak hiçbir değişiklik kaydedilmez.
Bir çözeltideki aşırı potasyum kostik, bakır renginde lekelenmeyle pozitif reaksiyon taklidi verebilir. Bu durumda, test edilen koloninin olumsuz yanıtı kaydedilmelidir. Ayrıca, reaktiflerin girişinden bir saat sonra değerlendirmenin verildiği durumlarda bakır boyaması görülür.
Sonucu değerlendirirken, incelenen mikroorganizmaların uzun süreli kültivasyonunun (üç günden fazla) ortamın asitlenmesine yol açtığı ve bu da çalışmanın yanlış sonucuna yol açabileceği dikkate alınmalıdır. Reaksiyon hafif pozitif veyayanlış negatif.
Test reaktifleri için gereksinimler
Voges-Proskauer reaktifleri, uygun depolama ile elde edilen doğru konsantrasyon, yüksek saflık ve stabilite gibi gereksinimleri karşılamalıdır.
Kullanıma hazır test kitleri tipik olarak 100 veya daha fazla kullanım için reaktifler içerir ve plastik veya renkli cam şişelerde gelir. Kalite, ilgili belgelerle düzenlenir.
