Bakteriyel enfeksiyonların çeşitliliği, patojenin net bir şekilde tanımlanmasını ve türünün tanımını gerektirir. Mikroorganizmanın türünü belirlemek için, mikrobiyologlara tentür özellikleri - mikrobun çeşitli boyalarla lekelenmeye duyarlılığı - yardımcı olur. Bu yöntem, patojenin morfolojisini keşfetmenizi sağlar. Bakterilerin tentürsel özellikleri, mikrobiyoloji alanındaki pratik ve teorik araştırmalar için büyük önem taşımaktadır.
Mikrobik araştırma
Bakteriyolojide mikroorganizmaları boyamak için birçok yöntem vardır. Hepsi bakterilerin tentür özelliklerine dayanmaktadır. Boyama, şekillerini, yapılarını, boyutlarını ve göreceli konumlarını belirlemenizi sağlar. Bu, genel biyoloji ve karşılaştırmalı mikrobiyolojinin mikroorganizma türlerini sistematikleştirme problemlerinin çözülmesine izin verir.
Neden onları boyayın
Bakteriler pratikteşeffaf organizmalar ve boyama kullanılmadan, geleneksel mikroskopi için çok az görülebilirler. Nesneleri incelemek için özel mikroskopi türleri (faz kontrastı, karanlık alan) kullanabilirsiniz, ancak en kolay yol, bakterilerin geleneksel bir ışık mikroskobunda görünür hale gelmesinin ardından leke yapmaktır.
Örnek hazırlama
Kullanılan boyama tekniğinden bağımsız olarak, incelenen nesneyi hazırlamak için tek tip kurallar vardır. Aşağıdaki aşamalar zorunludur:
- Steril aletler cam slayt üzerinde leke yapar.
- Örnek kurutuluyor. Bu, oda sıcaklığında veya kurutma dolapları kullanılarak yapılır.
- Ardından sabitleme aşaması - mikroorganizmalar özel bileşiklerle cama bağlanır.
- Uygun boyama - numune sabit bir süre boya ile kaplanır, ardından yıkanır.
- Son kurutma - numune tekrar kurutulur.
En yaygın boyalar
En sık kullanılan boyalar, farklı asit değerlerine (pH) sahip anilin bazlıdır. Çoğu boya, alkolde seyreltilmiş tozlardır.
Katyonların renklendirici ajan olduğu boyalara bazik (pH 7'den büyük) denir. Mikroorganizmaları kırmızı (macenta, safranin), menekşe (metil menekşe, tiyonin), mavi (metilen mavisi), yeşil (malakit yeşili), kahverengi (chrysoidin) ve siyah (indulin) renklerde boyamak için kullanılabilirler.
Renklendirici maddelerin anyon olduğu boyalara asidik (pH 7'den düşük) denir. Numuneyi kırmızı (eozin), sarı (pikrin) veya siyah (nigrosin) lekeleyeceklerdir.
Hem katyonların hem de anyonların renklendirici ajan olarak işlev gördüğü bir grup nötr boya vardır (örneğin, rodamin B).
Kültür ölü ya da diri
Boyama yöntemleri, test örneğinin yaşam formuna göre iki gruba ayrılır.
- Hayati (ömür boyu) boyama. Mikroorganizmaların özelliklerini incelemek için bu yöntem, mikropların hayati süreçlerini gözlemlemeyi mümkün kılan canlı dokuların çalışmasında kullanılır. Bu boyama için düşük toksisiteli ve yüksek penetrasyon gücüne sahip boyalar kullanılır.
- Yaşam sonrası boyama. Bu, ölü veya öldürülmüş mikroorganizmaların boyanmasıdır. Bakterilerin tentürel özellikleri sayesinde mikrobiyologlar yapılarını belirler. En yaygın olarak kullanılan bu boyamadır.
Gram-pozitif ve Gram-negatif
Çeşitli ilaçların talimatlarında bulunabilen bakterilerin bu özellikleridir. Bakterilerin tentür özelliklerini incelemek için kullanılan bu yöntem, centiyana menekşe boyası ve iyot fiksasyonu kullanımına dayanmaktadır. Bu, 1884'te Danimarkalı bir doktor olan Hans Christian Gram'ın tekniğidir. Bu boyama sonucunda bakteriler iki gruba ayrılır:
- Gram (+) - maviye dön(stafilokoklar ve streptokoklar).
- Gram (-) - pembeden kırmızıya leke (enterobakteriler, salmonella, E. coli).
Farklı boyama sonuçları, bakteri duvarlarının farklı tentürel özelliklerinden kaynaklanır. Gram boyama yöntemi, bazı bulaşıcı hastalıkların teşhisinde hala ana yöntemdir.
Diğer boyama teknikleri
Bakteriyolojide yaygın olarak kullanılan birkaç yöntemi daha tanımlayalım.
- Ziehl-Nelson yöntemi - bakterilerin asit direncini belirler. Tüberküloz ve mikobakteriyozun etken maddelerini tanımlar.
- Romanovsky-Giemsa tekniği - asidofilik (asetik asit ve laktik asit) bakterileri kırmızı ve bazofilik (spiroketler ve protozoa) maviye boyar.
- Morozov'un tekniği - bakterileri kahverengiye boyar ve kamçılarını görünür kılar.
Sporlar görülebilir
Tsiel'in fuchcin boyaması, bakteri sporlarını görmenizi sağlar. Boyamadan sonra pembe bir renge sahip olduklarından, mavi bakterilerin arka planında açıkça görülebilirler. Bu yöntem aynı zamanda bir bakteriyoloji aracıdır ve büyük pratik öneme sahiptir.
